RNA Pulldown、DNA Pull-down
實驗意義：
核酸與蛋白質的互作是細胞功能的核心，包括蛋白質合成、mRNA組裝等生命活動中重要的代謝過程，研究核酸與蛋白質的互作是研究生命科學的基本工具。
實驗原理及步驟
RNA Pull-down:通過體外轉錄RNA并用生物素進行標記，然后與胞漿蛋白混合物共同孵育形成RNA蛋白質復合物，然后用鏈霉親和素標記的磁珠分離純化該復合物(利用生物素與鏈霉親和素的非共價親和作用)。洗脫后進行檢測，如果檢測蛋白為已知蛋白可通過WB進行鑒定，如果檢測未知蛋白則可以結合質譜進行鑒定。流程為提取細胞胞漿蛋白樣品液- -體外轉錄合成生物素標記RNA-共孵育_ -磁珠純化- -洗脫得到互作蛋白. -WB或質譜鑒定。
DNA Pull-down:通過合成標記有生物素的DNA片段，與細胞核蛋白混合物共同孵育形成DNA-蛋白質復合物，然后用鏈霉親和素磁珠純化，WB或者質譜進行檢測鑒定。流程為提取核蛋白樣品液- -合成生物素標記DNA-共孵育- -磁珠純化- ~洗脫
得到互作蛋白- -WB或質譜鑒定。
結果展示
RNA Pull-down
DNA Pull-down .
實驗周期及交付標準
1.實驗周期: 1-2個月
2.交付標準:
RNA Pull-down:探針序列、X光片.實驗報告(實驗步驟、試劑、儀器等)
DNA Pull-down:探針序列、X光片.實驗報告(實驗步驟.試劑、儀器等)
需確認信息
1.目的基因種屬及ID號
2.基因序列信息
3.樣本種屬及類型
4.樣本數量.
5.分析要求
參考文獻
[1]Chen R,Liu Y，Zhuang H，et al. Quantitative proteomics reveals that long non-coding RNA MAL AT1 interacts withDBC1 to regulate p53 acetylation[J]. Nucleic Acids Research, 2017, 45(17):9947-9959.
[2]Tran D H , Shishido Y，Chung S P , et al. lnentication of DNA-binding proteins that interact with the 5-f1anking region
of the human D-amino acid oxidase gene by pull-down assay coupled with two-dimensional gel electrophoresis and
mass spectrometry[J]. Journal of Pharmaceutical & Biomedical Analysis, 2015, 116:94-100.
部分實驗代做服務
ELISA試劑盒免費代檢測 | CCK8檢測 | 基因組DNA提取
| 蛋白相互作用分析 |
Western Blot
| 免疫組化 | 熒光定量PCR | 動物模型服務 |
流式細胞檢測 | 細胞增殖 | 激光共聚焦 | DNA甲基化實驗 |
細胞劃痕 | 鈣離子濃度檢測 | 掃描電鏡實驗 | microRNA 測序 |
動物實驗 | Taqman探針 | ATP/ADP檢測
| 石蠟/冰凍切片 |
定點突變 | 線粒體膜電位(MMP)檢測 | 細胞生長曲線的測定 | 藥理毒理動物實驗
|
免疫共沉淀 | 真核表達載體構建 | 染色質免疫沉淀CHIP | 非標定量（Label-free）實驗 |
