CCK-8試劑盒是一種敏感性高、特異性強、重復性好的試劑盒,其試劑安穩、易保留、操作簡練、作用區分客觀等要素,適宜于大規模篩查實驗又能夠用于少數標本的檢查,能夠做定性實驗也能夠做定量分析。
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人心型脂肪酸結合蛋白(h-FABP)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人心型脂肪酸結合蛋白(h-FABP)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計算樣品濃度。
CCK-8試劑盒的實驗小貼士:
1、在收到試劑盒后,為保證檢測效果,需要根據說明書中保存條件正確儲存。除非特別注明,試劑盒大多是在2~8°C條件下儲存;
2、在實驗進行前,請確認包裝中的試劑盒成分與說明書一致,再進行后續操作;
3、溶解標準品過程中,注意標準品是否受潮,過程中要避免產生泡沫;
4、為了避免交叉污染,配置不同濃度標準品、上樣、加不同試劑都需要更換槍頭。另外不同試劑請分別使用不同的移液槽;
5、每次孵育時,正確使用封板膠紙可保證結果的準確性;
6、正確洗板有助于實驗結果的穩定性;
7、TMB顯色底物在上板前應為無色,請避光保存。加入孔板后,將由無色變成不同程度的藍色;
8、終止液上板順序需與底物上板順序一致,加入終止液,溶液顏色由藍色變為黃色。如果出現綠色,即表明終止液與底物未混勻,請充分混合。