ELISA試劑盒是一種敏感性高,特異性強,重復性好的實驗診斷方法。由于其試劑穩定、易保存,操作簡便,結果判斷較客觀等因素,已廣泛應用在免疫學檢驗的各領域中。
ELISA試劑盒工作原理:
1、抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。
2、結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性。
3、酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性,又保留酶的活性。
4、受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。再加入酶標記的抗原或抗體,也通過反應而結合在固相載體上。
5、此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。
6、加入酶反應的底物后,底物被酶催化成為有色產物,產物的量與標本中受檢物質的量直接相關,故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。
ELISA試劑盒洗板方法:
1、手工洗板:甩盡孔內液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。
2、自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。
ELISA試劑盒操作步驟:
1、從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2、設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
3、樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL;空白孔不加。
4、除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5、棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。
6、每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7、每孔加入終止液50μL,15min內,在450nm波長處測定各孔的OD值。